Immunhistochemische Assaytechniken zum Nachweis von Tumorantigenen

Immunhistochemische Assays werden häufig zum Nachweis von Tumorantigenen und zur Klassifizierung von Lymphozyten-Zelltypen in chirurgischen Pathologieabschnitten verwendet.

Die Gewebeprobe wird auf einem Objektträger befestigt.

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Enzymmarkierter mAb (Konjugat) wird über die Probe geschichtet und inkubiert.

ich. Wenn die Probe ein spezifisches Antigen gegen den mAb aufweist, bindet das Konjugat an das Antigen auf der Probe.

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Nach dem Waschen wird Substrat zugegeben und inkubiert.

ich. Farbentwicklung bedeutet, dass im Gewebeabschnitt ein spezifisches Antigen gegen den mAb vorhanden ist.

ii. In Abwesenheit eines spezifischen Antigens findet keine Farbentwicklung statt.

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Der Objektträger wird gewaschen und der Gewebeschnitt ist unter dem Mikroskop auf Farbe zu sehen.

Meerrettichperoxidase (HRP) ist das Enzym, das üblicherweise bei immunhistochemischen Techniken verwendet wird. Das Substrat für HRP ist Wasserstoffperoxid und Diamino-benzidin. Die Reaktion von HRP mit Diaminobenzidin erzeugt eine schwarze Farbe.

Peroxidase - Antiperoxidase (PAP) ist eine andere Methode, die in der Operationspathologie zum Nachweis von Enzymen und tumorassoziierten Antigenen verwendet wird.

Es ist eine dreistufige Methode:

Schritt 1:

Das Gewebe, von dem vermutet wird, dass es ein bestimmtes Antigen hat, wird an einem Objektträger fixiert.

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Bekannte Kaninchenantikörper gegen das fragliche Antigen fallen auf das Gewebe (vermutlich das Antigen enthalten), das auf einem Objektträger fixiert wird.

ich. Wenn sich das entsprechende Antigen im Gewebe befindet, bindet der Antikörper daran. Der Objektträger wird nach der Inkubation gewaschen.

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Schritt 2:

Anti-Kaninchen-Immunglobulin (Link-Antikörper genannt) wird auf den Objektträger fallen gelassen.

ich. Wenn sich der erste Kaninchenantikörper im Objektträger befindet (an das Antigen gebunden), bindet das Anti-Kaninchen-Immunglobulin an den Kaninchen-Antikörper. Nach der Inkubation wird der Objektträger gewaschen.

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Schritte 3:

Ein Immunkomplex, bestehend aus Kaninchen-Antikörpern gegen Peroxidase, kombiniert mit Peroxidase, wird fallen gelassen. Dieser Kaninchen-Antikörper bindet über seine Fc-Region an das Anti-Kaninchen-Immunglobin (Link-Antikörper-Schritt 2). Nach der Inkubation wird der Objektträger gewaschen.

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Schließlich wird Peroxidasesubstrat zugegeben. Das Substrat reagiert mit Peroxidase und führt zur Bildung eines gefärbten Produkts, das unter dem Mikroskop sichtbar ist.

ich. Das Vorhandensein des gefärbten Produkts auf dem Gewebe zeigt das Vorhandensein des entsprechenden Antigens an.

ii. Das Fehlen des gefärbten Produkts auf dem Objektträger zeigt an, dass das betreffende Antigen nicht im Gewebe vorhanden ist.