Verschiedene klinische Untersuchungen und Behandlungen für vermutete Immunschwächekrankheiten

Verschiedene klinische Untersuchungen und Behandlungen für vermutete Immunschwächekrankheiten!

Die Verringerung der Lymphozytenzahl (Lymphopenie) bei jungen Säuglingen rechtfertigt eine umgehende Untersuchung auf Immunschwäche.

Normale Neugeborene und Kleinkinder haben höhere Lymphozytenzahlen als ältere Kinder und Erwachsene. Eine normale oder erhöhte Anzahl von Lymphozyten bei Säuglingen und Kleinkindern schließt jedoch die Möglichkeit einer primären Immunschwäche nicht aus, da die Reaktion zwischen Transplantat und Wirt (GVH) nicht bei allen Patienten offensichtlich ist.

A. Die Bewertung eines Patienten mit Verdacht auf Immunschwäche beginnt mit folgenden Untersuchungen:

ich. Hämoglobin, mittleres Zellhämoglobin (MCH), mittlere Zellhämoglobinkonzentration (MCHC)

ii. RBCs Nummer. Hämatokrit (HCT), mittleres Zellvolumen (MCV), Retikulozytenzahl.

iii. Gesamtzahl der WBCs Gesamtlymphozytenzahl: Die meisten SCID-Patienten mit Thymushypoplasie haben dauerhaft niedrige Lymphozytenzahlen. Eine normale Lymphozytenzahl schließt jedoch SCID nicht aus. Darüber hinaus kann Lymphopenie sekundär sein bei Virusinfektionen, Unterernährung, Zellverlust, Autoimmunerkrankungen und Myelopathien.

iv. Differenzielle Leukozytenzahl (Neutrophile, Lymphozyten, Eosinophile, Basophile und Monozytenprozentsätze)

v. Absolute Anzahl von Neutrophilen, Basophilen, Eosinophilen, Monozyten und Lymphozyten.

vi. Erythrozyten-Sedimentationsrate (ESR)

vii. Thrombozytenzahl

viii. Natrium-, Kalium-, Calcium-, Chlorid- und Glukosewerte im Serum.

ix. Periphere Blutausstrichstudie

Eine weitere Beurteilung der immunologischen Kompetenz kann durch die folgenden Untersuchungen erfolgen.

B. Immunglobuline und Antikörper:

Serumspiegel von Immunglobulinen:

Die Serumspiegel von IgG, IgM, IgA, IgE und IgD werden quantitativ unter Verwendung von radialer Immundiffusion, automatisierter Immunoturbidometrie, Radioimmunoassay oder ELISA-Techniken gemessen. Die Immunglobulinkonzentrationen im Serum variieren mit dem Alter und der Umgebung. Daher müssen angemessene regionale und ethnische Alters- und Geschlechtsnormen verwendet werden.

Immunglobulinkonzentrationen können nicht als alleiniges Kriterium für die Diagnose einer primären Immundefizienz verwendet werden. Niedrige Immunglobulinkonzentrationen können auch auf eine Abnahme der Synthese oder auf den Verlust von Immunglobulinen zurückzuführen sein. Ein indirekter Hinweis auf einen Verlust kann durch Messung des Serumalbumins erhalten werden, das normalerweise gleichzeitig verloren geht (z. B. durch Magen-Darm- oder Nierenwege).

Normale Werte für Immunglobulin-Unterklassen sind verfügbar. Die Reichweite normaler Kinder ist jedoch sehr groß und wird durch genetische und geographische Unterschiede beeinflusst.

Immunelektrophorese und Immunfixierung sind beim Nachweis von M-Komponenten nützlich.

Natürliche Antikörper gegen die Blutgruppen A und B Antigene:

Natürliche Antikörper gegen die Antigene der Blutgruppen A und B werden manchmal als Maß für die Fähigkeit des Patienten zur Herstellung von IgM-Antikörpern gegen Kohlenhydratantigene untersucht.

Produktion spezifischer Antikörper nach der Immunisierung:

Normalbereiche von IgG-Antikörpern bei Kindern nach Impfungen sind verfügbar. Eine sorgfältige Interpretation ist jedoch erforderlich.

Lebendimpfstoffe (z. B. orale Polioimpfung, BCG, Masern, Röteln und Mumps) sollten niemals verabreicht werden, wenn der Verdacht auf eine primäre Immunschwäche besteht. Die Lebendimpfstoffe sollten auch nicht an andere Familienmitglieder gegeben werden.

ich. Unimmunisiertes Kind:

ein. Diphtherie / Tetanus (DT) - oder Hib-Impfstoffe (Haemophilus influenzae Typ b) können in empfohlenen Dosierungen an den Patienten verabreicht werden. Blut wird 3 Wochen nach der letzten Immunisierung entnommen und IgG-Antikörper gegen die injizierten Antigene werden durch ELISA-Technik gemessen.

Für Diphtherie-Antikörper kann ein Schick-Test durchgeführt werden.

b. Drei Impfungen mit abgetöteter Poliomyelitis (1, 0 ml intramuskulär in Abständen von 2 Wochen) können ebenfalls verwendet werden. Zwei Wochen nach der letzten Injektion wird das Blut durch Virusneutralisationsmethode auf spezifische Antikörper überprüft.

ii. Kind, das bereits mit einem Impfstoff gegen DPT oder DT oder Hib konjugiert wurde:

ein. Serum-IgG-Antikörper gegen Diphtherie, Tetanus, Pertusis und Haemophilus influenzae Typ B werden gemessen. Wenn die Antikörpertiter niedrig sind, wird eine Booster-Injektion verabreicht und die Antikörperspiegel werden später gemessen.

Der Schick-Test kann auch durchgeführt werden, um Antikörper gegen Diphtherie nachzuweisen.

Zusätzliche aktive Immunisierungen, die verwendet werden können:

ich. IgG-Antikörperantworten auf reine Kohlenhydratantigene:

Pneumococcus-Polysaccharid / Meningococcus-Polysaccharid / Haemophilus influenzae Typ B-Polysaccharid (frei von Trägerproteinen) / Typhus-VI-Antigene können injiziert werden, und Serum-IgG-Antikörper gegen die injizierten Antigene werden aus den 3 Wochen nach der Injektion entnommenen Blutproben gemessen. (Diese Polysaccharide und andere reine Polysaccharid-Antigene sind bei Säuglingen unter 2 Jahren nicht nützlich. Darüber hinaus ist die Interpretation der Ergebnisse bei Kindern unter 5 Jahren schwierig, da das Alter, bei dem sich die Reaktion entwickelt, 2 bis 4 Jahre beträgt.)

ii. Hepatitis-A-Impfstoff

iii. Der Hepatitis-B-Impfstoff ist kein zuverlässiges Antigen zum Testen der Immunkompetenz. Weil in der Bevölkerung eine hohe Häufigkeit von Nicht-Respondern auftritt, insbesondere bei Patienten über 40 Jahren.

C. B-Lymphozytenzahl:

Durchflusszytometrie unter Verwendung von fluoreszenzmarkierten monoklonalen CD19- und CD20-Antikörpern wird verwendet, um die Anzahl der B-Zellen zu zählen. Eine immunzytologische Methode kann verwendet werden, um den Prozentsatz von B-Zellen im Vollblutfilm zu bestimmen.

Pre-B-Zellen im Knochenmarkaspirat werden mit gereinigten Flurochrom-markierten Antikörpern identifiziert, um zytoplasmatische µ-Schwerketten in C019 ⁺ -Zellen nachzuweisen.

D. T-Lymphozytenzahl:

Durchflußzytometer unter Verwendung von fluoreszenzmarkierten monoklonalen Antikörpern gegen CD3 wird verwendet, um die Gesamtzahl der T-Zellen zu bestimmen. Fluoreszenzmarkierte CD4- und CDS-monoklonale Antikörper werden verwendet, um Helfer-T-Zellen bzw. zytotoxische T-Zellen aufzuzählen.

Bei Verdacht auf Hyper-IgM-Immundefizienz werden T-Zellen zuerst durch PMA und Inomycin aktiviert und dann auf die Expression des CD40-Liganden (CD40L) auf ihrer Oberfläche analysiert.

In-vitro-Stimulation von Lymphozyten:

Lymphozyten können in vitro durch folgende Mittel aktiviert werden:

ich. Mitogene:

Phytohämagglutinin (PHA), Pokeweed-Mitogen (PWM), Concanavalin (Con A).

ii. Antigene:

PPD, Candida, Streptokinase, Tetanustoxoid und Diphtherietoxoid.

iii. Allogene Zellen.

iv. Antikörper gegen T-Zelloberflächenmoleküle, die an der Signaltransduktion beteiligt sind, wie CDS, CD2, CD28 und CD43.

Nach der Aktivierung können die aktivierten Lymphozyten auf folgende Weise nachgewiesen werden:

1. Nachweis der Expression von Aktivierungspickern:

Aktivierte T-Zellen exprimieren CD69, IL-2-Rezeptor a (CD25), Transferrin-Rezeptor (CD71) und MHC-Klasse-II-Moleküle (ruhende T-Zellen exprimieren oder exprimieren nur wenige MHC-Klasse-II-Moleküle). 1-2 Tage nach der Stimulation von T-Zellen mit einem Mitogen (wie PHA) werden die Zellen mit einem Durchflusszytometer unter Verwendung von fluoreszenzmarkierten monoklonalen Antikörpern gegen CD25-, CD71- oder MHC-Klasse-II-Moleküle untersucht.

2. Nachweis der biastogenen Reaktion in aktivierten T-Zellen:

Die mononukleären Zellen werden mit einem Mitogen stimuliert und dann ³ H oder ¹⁴ C-markiertes Thymidin zu der Kultur gegeben. 16 bis 24 Stunden später werden die Zellen präzipitiert und die Menge an in die Zellen eingebautem Radionukleotidmaterial wird im Flüssigszintillationszähler gezählt. Die Anzahl der Radio-Nukleotide wird als Maß für die T-Zellaktivierung verwendet.

3. Gemischte Lymphozytenreaktion (MLC).

4. Quantifizierung von durch aktivierte T-Zellen sekretiertem IL-2:

Mononukleäre Zellen des peripheren Blutes werden in einem In-vitro-Zellkultursystem mit einem Mitogen stimuliert. Der Überstand wird dann gesammelt und die Menge an IL-2 im Überstand wird unter Verwendung des ELISA-Verfahrens oder der ³ H-Thymidin-Aufnahme durch Maus-IL-2-abhängige kultivierte T-Zelllinien (z. B. CTLL2) quantifiziert.

F. Hauttest:

Mumps, Trichophyton, gereinigtes Proteinderivat (PPD), Candida, Tetanustoxoid und Diphtherietoxoid sind die Antigene, die im Allgemeinen zum Auslösen einer verzögerten Hypersensitivitätsreaktion (DTH) in der Haut verwendet werden. Um eine defekte CMI-Antwort zu beurteilen, müssen mehrere Antigene getestet werden. 0, 1 ml jedes Antigens wird intradermal injiziert, und der maximale Durchmesser der Aushärtung wird 48 bis 72 Stunden nach der Injektion gemessen.

Eine positive DTH-Antwort ist informativ. Darüber hinaus wird die DTH-Reaktion durch Alter, Steroidtherapie, schwere Erkrankungen und aktuelle Immunisierungen beeinflusst. Negative DTH-Reaktionen sind jedoch schwer zu interpretieren (insbesondere bei Säuglingen und Kleinkindern), da sie den getesteten Antigenen nicht zuvor ausgesetzt (dh sensibilisiert) waren.

G. NK-Zellen:

Fluoreszenzmarkierte monoklonale Antikörper gegen CD16, CD56 und CD57 werden in einem Durchflusszytometer verwendet, um die Anzahl der NK-Zellen zu zählen. Die funktionelle Aktivität von NK-Zellen kann durch einen Zytotoxizitätsassay gegen Zelllinien wie K562 bewertet werden.

H. Hämolytisches Komplement insgesamt:

Komplettes hämolytisches Komplement und individuelle Komplementkomponenten von klassischen und alternativen Komplementpfaden.

I. Phagozytose Funktionen

ich. Reduktionstest auf Nitro-Blau-Tetrazolium-Farbstoff

ii. Messung der O ₂ ^- Radikalbildung nach Stimulation von Blutzellen mit PMA oder Dichlorfluor.

iii. Quantifizierung der Fähigkeit der Phagozyten, Staphylokokken oder Paracolobazillen aufzunehmen und abzutöten.

iv. Die Integrität der Entzündungsreaktion kann mit der Rebuk-Hautfenstertechnik getestet werden.

v. Messung von Chemotaxis, Chemokinen und der Fähigkeit, ausgewählte inflammatorische Cytokine herzustellen und freizusetzen.

vi. Beurteilung der Expression von Adhäsionsmolekülen (zB CD18).

J. Knochenmarkaspiration oder Knochenmarkbiopsie:

Die Knochenmarkaspiration dient der Identifizierung von Plasmazellen und Pre-B-Zellen. Knochenmarkbiopsie oder -aspiration wird auch verwendet, um andere Krankheiten auszuschließen sowie obskure Infektionen zu diagnostizieren.

K. Lymphknotenbiopsie:

Eine Lymphknotenbiopsie ist für die Diagnose der meisten Immunschwächekrankheiten nicht erforderlich. Es kann jedoch hilfreich sein. Schnell wachsende Lymphknoten sollten biopsiert werden, um eine Infektion, Malignität oder follikuläre Hyperplasie zu finden. Eine Lymphknotenbiopsie ist jedoch bei SCID-Patienten potenziell gefährlich, da sie langsam heilt und als Eintrittspforte für Mikroben in den Patienten fungieren kann.

L Rektale und intestinale Biopsie:

Bei Patienten mit häufig auftretender variabler Immunschwäche und selektivem IgA-Mangel können Untersuchungen von rektalem Gewebe auf Plasmazellen und Lymphzellen hilfreich sein. Lymphoide Zellen werden in rektalen und intestinalen Biopsien bei normalen Säuglingen gefunden, die älter als 15-20 Tage sind. Jejunale Biopsie kann eine Zottenatrophie und Giardia lamblia und Cryptosporidium-Infektionen aufweisen.

M. Hautbiopsie:

Die Hautbiopsie ist nützlich, um eine Diagnose der GVH-Reaktion bei Patienten mit Immunschwäche nach Bluttransfusion, Knochenmarktransplantation und Transplantation von fötalem Gewebe zu stellen. Die Hautbiopsie ist auch nützlich, um die GVH-Reaktion aufgrund der Übertragung von Lymphozyten im Uterus von der Mutter auf den Fötus während der Schwangerschaft zu bestimmen.

N. Thymus-Biopsie:

Die Thymusbiopsie wird nur bei Verdacht auf ein Thymom durchgeführt.

Chimärismus (Vorkommen bei einem Individuum von zwei genetisch unterschiedlichen Zelllinien):

Wenn eine Person Zellen (wie WBCs) von einem anderen genetisch anderen Individuum erhält, hat der Empfänger zwei genetisch unterschiedliche Zelltypen (einen Zelltyp des Empfängers selbst und den anderen vom Spender) und wird als Chimärismus bezeichnet. Während der Schwangerschaft können mütterliche Lymphozyten in den fetalen Kreislauf eintreten. Daher wird der Chimärismus als angeborener Chimärismus bezeichnet.

Durch Bluttransfusion / Knochenmarktransplantation / Transplantation von fötalem Gewebe werden die Zellen eines anderen genetisch unterschiedlichen Individuums in den Patienten eingeführt, und es wird gesagt, dass der Chimärismus erworbener Chimärismus ist. Das Vorhandensein und der Ursprung von lymphoiden chimären Zellen kann durch Karyotypisierung / HL A-Typisierung / andere Antigen-Typisierung und Analyse von stark polymorphen Markern ermittelt werden.

O. Sonderuntersuchungen:

ich. Bei allen Patienten, bei denen Verdacht auf SCID- und T-Zellmangel besteht, sollten die Adenosindeaminase- (ADA) - und Purin-Nukleosidphosphatase- (PNP) -Enzymspiegel bestimmt werden.

ii. Der Alpha-Fetoproteinspiegel im Serum kann nützlich sein, um Patienten mit Ataxie-Teleangiektasie von Patienten mit anderen neurologischen Störungen zu trennen. Der Alpha-Fetoproteinspiegel im Serum ist bei mindestens 95 Prozent der Ataxie-Teleangiektasie-Patienten erhöht (40-2000 mg / L).

iii. Die mononukleären Blutzellen von SCID-Patienten sollten auf das Vorhandensein von MHC-Klasse-II-Molekülen untersucht werden (um die Möglichkeit eines MHC-II-Mangels auszuschließen).

iv. Die zytogene Analyse ist nützlich bei der Diagnose von Ataxiatelangiektasie und anderen Chromosomenbruchsyndromen.

v. Molekulare zytogenetische Studien sind hilfreich bei der Diagnose des DiGeorge-Syndroms und informativ bei anderen Erkrankungen.

vi. Analyse des Gens auf molekularer Ebene sowie Demonstration der Genprodukte.

P. Isolierung und Identifizierung der Infektionserreger:

Bei Patienten mit Immunschwäche ist die Diagnose von Virusinfektionen durch Antikörperbestimmung von geringem oder keinem Wert, da ihre Antikörperproduktion selbst fehlerhaft ist. Daher ist die Isolierung und Identifizierung des Virus unerlässlich. Eine direkte Virusisolation durch Viruskulturmethoden oder PCR-Verfahren zur Identifizierung des Virusgenoms ist erforderlich. CSF-Kulturen sind in Fällen wichtig, in denen der Verdacht auf eine Infektion des zentralen Nervensystems besteht. Bronchialspülung kann bei der Diagnose von Pnumocystis carinii und anderen Erregern der Atemwege nützlich sein. Die HIV-Infektion sollte durch Western Blot und PCR-Tests auf HIV ausgeschlossen werden.

F. Vorgeburtliche Diagnose (dh Diagnose vor der Geburt eines Kindes):

Eine vorgeburtliche Diagnose kann aus fötaler Blutprobe, Amnionzellen und Chorionzottenbiopsie gestellt werden.

ich. Das Fehlen von T- oder B-Zellen im Nabelschnurblut des Fötus kann für die vorgeburtliche Diagnose von SCID bzw. X-gebundener Agammaglobulinämie verwendet werden. Wenn immer möglich, sollte die pränatale Diagnose von molekularen Tests begleitet werden.

ii. Das Fehlen von Zellmembrankomponenten wie MHC-Klasse-II-Molekülen und CD18 in fötalen Blutzellen kann MHC-Klasse-II-Mangel bzw. Leukozytenadhäsionsmangel vom Typ 1 identifizieren.

iii. ADA-Mangel und PNP-Mangel beim Fötus können aus Chorionzotten oder aus fötalen Blutproben diagnostiziert werden.

R. Genetische Trägererkennung:

Jüngste Fortschritte bei der genauen Kartierung der verschiedenen Immundefizienzkrankheiten und der Verfügbarkeit von stark polymorphen Markern helfen bei der Erkennung von Trägern und der pränatalen Diagnose.

ich. Wenn der Ort des Gens angemessen identifiziert wurde, können polymorphe Marker Träger mit angemessener Sicherheit in informativen Familien identifizieren.

ii. Wenn ein spezifischer Enzym- oder Komplementkomponentenmangel festgestellt wird, können heterogene Träger in der Familie aus einer reduzierten Menge des Enzyms oder der jeweiligen fraglichen Komplementkomponente ermittelt werden.