Klinische Anwendungen des Durchflusszytometers
Klinische Anwendungen des Durchflusszytometers!
1. Aufzählung verschiedener Zellen (wie T-Zellen und B-Zellen).
2. Nachweis von B-Zell-Antigenen und Klassifizierung hämatopoetischer Malignome (Leukämien und Lymphome).
3. Nachweis von Antigenen auf der Oberfläche myeloischer Zellen, was bei der Diagnose myelodysplastischer Syndrome und myeloischer Leukämie nützlich ist.
4. CD34-Moleküle werden auf der Oberfläche hämatopoetischer Stamm-Vorläuferzellen exprimiert. Stammzellen, die aus Knochenmark oder peripherem Blut isoliert wurden, werden unter Verwendung markierter mAbs zu CD34 gezählt, so dass die genaue Anzahl der Stammzellen berechnet und einem Patienten übertragen werden kann. Die verbleibenden Stammzellen werden in flüssigem Stickstoff gelagert und können bei Bedarf zu demselben Patienten übertragen werden.
5. HLA-Phänotypisierung Fluorchrom-markierte mAbs für jedes HLA-Antigen werden zur Bindung von MHC-Klasse-I- und Klasse-II-Antigenen auf der Oberfläche von Zellen verwendet. Die gefärbten Zellen werden anschließend im Durchflußzytometer analysiert (wenn die Zellen als einzelne Säule durchlaufen).
6. Nachweis von intrazellulären Antigenen
Die Zellen werden zuerst mit Mitteln behandelt, die die Zelle durchlässig machen, ohne die Zelle vollständig zu brechen.
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Anschließend werden die Zellen mit milden Konservierungsmitteln behandelt, um die zytoplasmatischen Proteine an Ort und Stelle zu vernetzen und zu verhindern, dass sie aus der Zelle austreten.
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Dann werden die Zellen mit markierten mAbs behandelt, die gegen intrazelluläre Antigene gerichtet sind. Die markierten mAbs dringen in die Zellen ein und binden an die intrazellulären Antigene.
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Die Zellen werden durch das Durchflusszytometer geleitet, um die gefärbten Zellen zu bewerten.
ich. Der Nachweis der intrazellulären terminalen Desoxynukleotidtransferase (TdT) hilft dabei, frühe B-Zell-Malignitäten zu erkennen. TdT ist ein Enzym, das während der Umlagerung von Immunglobulingen exprimiert wird und für die Zugabe von zufälligen Nukleotiden an den Verbindungen von Immunglobulinsegmenten verantwortlich ist. Daher zeigt die Expression von TdT in einer malignen B-Zellpopulation einen sehr unreifen B-Zellphänotyp.
ii. Der Nachweis von intrazellulärer Myeloperoxidase hilft bei der Klassifizierung verschiedener Subtypen myeloischer Leukämien.
7. Analyse des DNA-Gehalts von Zellen. Ein Durchflusszytometer kann die Menge an genetischem Material in einer Zelle bestimmen und die S-Phasenfraktion oder die Menge an Aneuploidie in einer Population von Zellen bestimmen, a. DNA-Ploidie Normale Zellen, die zwei Kopien des Chromosoms enthalten, werden diploide Zellen genannt.
Alle Zellen (außer Eizelle und Spermien), die nicht diploid sind, werden als aneuploid betrachtet und können als verlässlicher Indikator für eine Neoplasie dienen. Eine große Anzahl von Zellen in einem Tumor weist eine abweichende Menge an DNA auf. Die durchflusszytometrische DNA-Analyse wird durch Inkubation permeabilisierter Zellen mit Fluoreszenzfarbstoffen (wie Propidiumiodid) durchgeführt.
Der Farbstoff interkaliert in DNA und fluoresziert. Die Fluoreszenzmenge ist direkt proportional zum DNA-Gehalt der Zelle. Die Wirksamkeit einer Chemotherapie gegen Malignität bei einem Patienten kann durch Ploidieanalyse beurteilt werden. Die Ploidie-Analyse bestimmt die Gesamtmenge an Kern-DNA in den einzelnen Tumorzellen. Der DNA-Index ist das Verhältnis der DNA-Fluoreszenz einer Tumorzelle zur DNA-Fluoreszenz einer normalen Zelle. Der DNA-Index einer normalen diploiden Zelle beträgt 1. Ein DNA-Index von mehr oder weniger als 1 weist auf einen aneuploiden Tumor hin.
b. DNA-Zellzyklusanalyse:
Der DNA-Gehalt von Zellen in verschiedenen Zellzyklusphasen während der Replikation (dh Gq / Gj-Phase vor DNA-Synthesephase; S-Phase-DNA-Synthese; G2 / M-Phase nach Post-DNA-Synthesephase) kann zur Beurteilung des Zellwachstums gemessen werden Krebs Aggressivität. Mehr DNA wird von aggressiven Krebszellen synthetisiert. Zellen, die die S-Phase durchlaufen, zeigen eine DNA-Synthese, die direkt proportional zu ihrer Aggressivität ist.
8. Viele Leukozyten-Funktionstests können mit einem Durchflusszytometer durchgeführt werden.
ich. Herstellung von O 2 - (Superoxid) als Assay für chronische Granulomatose.
9. Nachweis der Zelllebensfähigkeit:
Der Farbstoff Propidiumjodid dringt in Zellen ein, die Membranen und eine zerstörte Kernstruktur haben. Mit Propidiumjodid fluoreszieren daher tote Zellen, während lebende Zellen nicht fluoreszieren. Darüber hinaus ist die Fluoreszenz von Propidiumiodid im weit roten Bereich des Spektrums. Daher kann dieses Verfahren mit einer regulären mAb-Färbung kombiniert werden, wobei die toten Zellen rot gefärbt werden und somit bei der Datenanalyse weggelassen werden können.
10. Durchflußzytometrische Verfahren zum Nachweis von Apoptose-Zellen sind ebenfalls verfügbar.
