Voges-Proskauer-Experiment an Bakterien zur Ermittlung ihrer Fähigkeit, Glukose zu verwenden (mit Abbildung)

Lesen Sie diesen Artikel, um mehr über den Voges-Proskauer-Test (VP-Test) an Bakterien zu erfahren, um herauszufinden, wie sie Glukose bei der Herstellung von Acetylmethylcarbinol einsetzen kann!

Prinzip:

Einige Bakterien haben die Fähigkeit, Glukose zu verwenden und in Acetylmethylcarbinol (Acetoin) umzuwandeln, das ein neutrales Endprodukt ist.

Diese Bakterien wandeln anfänglich Glukose zu Brenztraubensäure um, die über das metabolische Zwischenprodukt Essigsäure zu Acetylmethylcarbinol (Acetoin) und C0 2 über den "Butylenglycol-Weg" weiter metabolisiert wird.

Acetylmethylcarbinol wird unter alkalischen Bedingungen (40% KOH) in Gegenwart von a-Naphthol zu Diacetyl oxidiert. Diacetyl reagiert mit der Guanidingruppe von Kreatin (aus Pepton, das im Kulturmedium verwendet wird), um rosafarbene Farbe zu erzeugen.

Im Voges-Proskauer-Test (VP-Test) werden die Testbakterien in einer Brühe gezüchtet, die Glucose enthält. Wenn die Bakterien die Fähigkeit haben, Glucose unter Bildung von Acetylmethylcarbinol (Acetoin) als neutralem Endprodukt zu verwenden, erhält die Bouillon nach Zugabe von a-Naphthollösung, gefolgt von 40% KOH, eine rosafarbene Farbe.

Erforderliche Materialien:

Reagenzgläser, Erlenmeyerkolben, Wattestopfen, Impföse, Autoklav, Bunsenbrenner, Laminar-Flow-Kammer, Entsorgungsgefäß, Inkubator, MR-VP-Bouillon (oder Glucosephosphat-Bouillon), VP-Lösung I (Barritt-Reagenzlösung A) und VP-Lösung II (Barritts Reagenzlösung B) isolierte Kolonien oder Reinkulturen von Bakterien.

Verfahren:

1. Die Inhaltsstoffe des MR-VP-Bouillonmediums (das Glukose als Hauptkomponente enthält) oder seines für 100 ml der Bouillon benötigten Fertigpulvers wird abgewogen und in 100 ml destilliertem Wasser in einem 250-ml-Erlenmeyerkolben durch Schütteln und Auflösen gelöst Wirbeln (Abbildung 7.5). Die für den Methylrottest verwendete Brühe kann auch hier verwendet werden. Normalerweise wird für beide Tests (MR und VP) gleichzeitig dieselbe Brühe verwendet.

2. Sein pH-Wert wird unter Verwendung eines pH-Papiers oder eines pH-Meters bestimmt und mit 0, 1 N HCl auf 6, 9 eingestellt, wenn es mehr ist, oder mit 0, 1 N NaOH, wenn es weniger ist. Der Kolben wird gegebenenfalls erhitzt, um die Bestandteile vollständig aufzulösen.

3. Die Brühe wird in fünf Reagenzgläser (je ca. 10 ml) verteilt, mit Watte verstopft, mit Bastelpapier abgedeckt und mit Faden oder Gummiband gefesselt.

4. Die Bouillonröhrchen werden 15 Minuten bei 121 ° C (15 psi Druck) in einem Autoklaven sterilisiert.

5. Man lässt die Bouillonröhrchen auf Raumtemperatur abkühlen.

6. Die Testbakterien werden aseptisch, vorzugsweise in einer Kammer mit laminarer Strömung, in die Brühe mit Hilfe einer über Bunsenflamme sterilisierten Impfschleife inokuliert. Die Schlaufe wird nach jeder Impfung sterilisiert.

7. Die inokulierten Bouillonröhrchen werden 48 bis 72 Stunden bei 37 ° C in einem Inkubator inkubiert.

8. VP-Lösung I (enthaltend α-Naphthol) wird in die Bouillonröhrchen (jeweils 0, 2 ml) getropft und sorgfältig gemischt.

9. VP-Lösung II (enthaltend KOH) wird in die Bouillonröhrchen (jeweils 0, 6 ml) getropft, gründlich gemischt und 30 Minuten bis 2 Stunden stehen gelassen.

Beobachtungen:

1. Rosafarbene Farbe: VP positiv.

2. Rosafarbene Farbe nicht erzeugt: VP negativ.