Tripelzuckereisentest an Bakterien zur Ermittlung der Fähigkeit, Schwefelwasserstoff herzustellen (mit Abbildung)
Lesen Sie diesen Artikel, um mehr über den dreifachen Zucker-Eisentest von Bakterien zu erfahren, um herauszufinden, ob es möglich ist, Schwefelwasserstoff herzustellen!
Versuchen Sie, einen dreifachen Zucker-Eisentest (TSI-Test) durchzuführen, um herauszufinden, inwieweit ein Bakterien einen oder mehrere der drei Zucker wie Glukose, Saccharose und Laktose sowie dessen Fähigkeit zur Herstellung von Schwefelwasserstoff (H 2) verwenden kann S), wodurch Eisen reduziert wird.
Prinzip:
Einige Bakterien können einen oder mehrere der drei Zucker wie Glukose, Saccharose und Laktose verwenden.
Wenn einer oder mehrere der drei Zucker (Dreifachzucker) verwendet werden, wird Säure erzeugt, die den pH-Wert verringert und die Farbe von Phenolrot von Rot nach Gelb ändert.
Darüber hinaus haben einige Bakterien die Fähigkeit, Schwefelwasserstoff (H 2 S) unter Verwendung von Schwefelverbindungen herzustellen. Das so erzeugte H 2 S verbindet sich mit der Eisenverbindung, Eisensulfat, zu schwarzen Ausfällungen von Eisensulfid.
Bei dem dreifachen Zuckereisentest (TSI-Test) werden die Testbakterien auf Agarschrägen gezüchtet, die Glukose, Saccharose, Laktose, Phenolrot, Natriumthiosulfat und Eisen (II) -sulfat enthalten. Während das Medium Glucose (dh D-Glucose oder Dextrose) in einer geringen Konzentration von 0, 1% enthält, wird die Konzentration von Saccharose und Lactose bei 1% gehalten.
Wenn die Bakterien die Fähigkeit haben, einen oder mehrere der drei Zucker zu verwenden, ändert sich die Farbe des Mediums von rot nach gelb. Wenn die Bakterien die Fähigkeit haben, H 2 S zu produzieren, erhält das Medium eine schwarze Farbe. Da drei Zucker und eine Eisenverbindung in dem Medium verwendet werden, wird der Test als dreifacher Zuckereisentest bezeichnet.
Erforderliche Materialien:
Reagenzgläser, Erlenmeyerkolben, Wattestopfen, Impfnadel, Autoklav, Bunsenbrenner, Laminar-Flow-Kammer, Entsorgungsglas, Inkubator, Triple-Sugar-Eisen-Agar (TSI), isolierte Kolonien oder Reinkulturen von Bakterien.
Verfahren:
1. Die Inhaltsstoffe des TSI-Agarmediums (enthaltend 3 Zucker und Eisen als Hauptbestandteile) oder seines für 100 ml des Mediums erforderlichen Fertigpulvers werden abgewogen und in 100 ml destilliertem Wasser in einem 250-ml-Erlenmeyerkolben gelöst Schütteln und Wirbeln (Abbildung 7.7).
2. Sein pH-Wert wird unter Verwendung eines pH-Papiers oder eines pH-Meters bestimmt und unter Verwendung von 0, 1 N HCl auf 0, 1 eingestellt, wenn weniger als 0, 1 N NaOH verwendet wird.
3. Der Kolben wird erhitzt, um den Agar vollständig in dem Medium aufzulösen.
4. Bevor es sich verfestigt, wird das Medium in warmem geschmolzenem Zustand in 5 Teströhrchen (jeweils ca. 20 ml) verteilt.
5. Die Reagenzgläser sind mit Baumwolle verstopft, mit Bastelpapier bedeckt und mit Faden oder Gummiband gebunden.
6. Sie werden bei 121 ° C (15 psi Druck) 15 Minuten in einem Autoklaven sterilisiert.
7. Nach der Sterilisation werden sie aus dem Autoklaven genommen und in einer schrägen Position gehalten, um das Medium abzukühlen und zu verfestigen, um TSI-Agar-Schrägen zu erhalten.
8. Die Testbakterien werden aseptisch, vorzugsweise in einer Laminar-Flow-Kammer, in die Schrägen inokuliert, indem sie in den Kolben stechen und mit Hilfe einer flammensterilisierten Nadel auf der Oberfläche der Schrägen streifen. Die Nadel wird nach jeder Impfung sterilisiert.
9. Die inokulierten Schrägen werden 24 Stunden bei 37 ° C in einem Inkubator inkubiert.
Beobachtungen:
1 Gelber Hintern und rote Schräge mit oder ohne Gasförderung (Bruch im Agarbein)
Säurefuß und alkalische Schräge haben sich gebildet. Hier wurde nur Glucose anaerob (fermentativ) verwendet, wodurch der Kolben angesäuert wurde (gelb). Es wurde kein anderer Zucker verwendet. Da die Glukosekonzentration geringer ist (0, 1%), wird die geringe Menge an Säure, die auf der geneigten Oberfläche erzeugt wird, schnell oxidiert und alkalisch (rot).
Ferner erzeugt die oxidative Dominierung des in dem Medium vorhandenen Peptons NH Y, das die Schräge alkalisch (rot) macht. Im Stumpf wird der saure Zustand jedoch aufgrund der verringerten Verfügbarkeit von Sauerstoff und langsamerem Wachstum der Bakterien aufrechterhalten. Somit ist das Bakterium Glukose-positiv.
2 Gelber Hintern und gelbe Schräge mit oder ohne Gasförderung:
Säurefuß und Säureschräge wurden gebildet. Hier wurden Laktose und / oder Saccharose fermentiert. Da ihre Konzentration im Medium hoch ist, produzieren sie eine große Menge Säuren, was zu einer sauren Neigung und einem sauren Kolben führt und den sauren Zustand aufrechterhält. Somit ist das Bakterium Sucrose / Lactose-positiv.
3. Roter Hintern und rote Schräge:
Keiner der drei Zucker wurde fermentiert. Stattdessen wurden Peptone unter anaeroben und / oder aeroben Bedingungen katabolisiert, was aufgrund der Ammoniakproduktion zu einem alkalischen Zustand führt.
Wenn nur ein aerober Abbau von Peptonen auftritt, wird nur die geneigte Oberfläche alkalisch (rot). Bei einem aeroben und anaeroben Abbau von Pepton wird sowohl die Schräge als auch der Kolben alkalisch (rot). Somit ist das Bakterium zuckernegativ.
4 Schwärzung des Hinterns:
Wenn eine Stumpfschwärzung auftritt, bedeutet dies zusätzlich zu einer der obigen Bedingungen, dass die Bakterien unter Verwendung des in dem Medium vorhandenen anorganischen Schwefels (Natriumthiosulfat) H 2 S erzeugen können.
Das H 2 S verbindet sich mit dem Eisen (II) -sulfat im Medium, um schwarze Ausfällungen von Eisen (II) -sulfid zu bilden, was zu einer Änderung der Farbe des Mediums zu Schwarz führt. Somit sind die Bakterien H 2 S-positiv.
5 Keine Schwärzung des Hinterns:
Die Bakterien sind nicht in der Lage, H 2 S unter Verwendung des in dem Medium vorhandenen anorganischen Schwefels (Natriumthiosulfat) zu erzeugen. Somit ist das Bakterium H 2 S-negativ.
