Standardisierung von Arzneipflanzen (WHO-Richtlinien)

1. Botanische Bewertung:

ein. Sensoriktest:

ich. Visuelle Mikroskopie:

ii. Berühren.

iii. Geruch.

iv. Geschmack.

b. Fremdstoff:

ich. Ausländische Pflanzen.

ii. Fremde Tiere.

iii. Fremdmineralien usw.

c. Mikroskopie:

ich. Histologische Beobachtung

ii. Histochemischer Nachweis

iii. Messungen.

2. Physiochemische Bewertung:

ein. Dünnschichtchromatographie.

b. Extraktionsmittel

ich. Heißwasserlöslicher Extraktionswert.

ii. Kaltes Wasser Extrakt.

iii. Extraktionsmittel aus Ethanol

c. Wassergehalt und flüchtige Bestandteile:

LOD, Azeotrop.

d. Flüchtige Öle:

Durch Wasserdampfdestillation.

3. Pharmakologische Bewertung:

ein. Bitterkeitswert:

Einheitsgleichung zur Bitterkeit der Standardlösung von Chininhydrochlorid

b. Hämolytische Aktivität:

Ochsenblut im Vergleich zu Standardreferenzsaponin

c. Adstringenz:

Fraktion (Tannine), die an Standardhautpulver bindet.

d. Quellindex:

Im Wasser.

e. Schäumungsindex:

Schaumhöhe, hergestellt aus 1 g Material unter festgelegten Bedingungen.

4. Toxikologische Bewertung:

ein. Pestizidrückstände:

(i) gesamtes organisches Chlorid

(ii) organischer Gesamtphosphor

b. Arsen:

Auf HgBr _2- Papier erzeugter Stamm im Vergleich zur Standardfärbung.

c. Schwermetalle:

Cadmium und Blei

5. Mikrobiologische Kontamination

ein. Gesamtzahl der lebensfähigen aeroben.

b. Krankheitserreger:

Enterobacteriaceae, E. coli, Salmonella, P. aerogenosa und S. aureus

c. Aflatoxine:

Durch TLC unter Verwendung von Standard-Aflatoxinen (B ₁, B ₂, G ₁, G ₂ )

6. Radioaktive Kontamination

Makroskopisch Zeichen:

Die makroskopische Identität von medizinischen Pflanzenmaterialien basiert auf Form, Größe, Farbe, Oberflächeneigenschaften, Textur, Bruchcharakteristik und Aussehen der Schnittfläche.

(i) Größe:

Für die Messung der Länge, Breite und Dicke von Rohmaterial genügt ein Maßlineal in Millimetern.

Kleine Samen und Früchte können gemessen werden, indem 10 von ihnen auf einem Blatt kalibriertem Papier mit einem Abstand von 1 mm zwischen den Linien ausgerichtet werden und das Ergebnis durch 10 geteilt wird.

(ii) Farbe:

Untersuchen Sie die unbehandelte Probe unter diffusem Tageslicht. Die Farbe der Probe sollte mit der einer Referenzprobe verglichen werden.

(iii) Oberflächeneigenschaften, Textur- und Brucheigenschaften:

Untersuchen Sie die unbehandelte Probe. Bei Bedarf kann eine Vergrößerungslinse verwendet werden. Die Benetzung mit Wasser oder Reagenzien kann erforderlich sein, um die Eigenschaften einer Schnittfläche zu beobachten.

Berühren Sie das Material, um festzustellen, ob es weich oder hart ist. biegen und reißen, um Informationen über die Sprödigkeit und das Aussehen der Bruchfläche zu erhalten - ob sie faserig, glatt, rau und körnig ist usw.

(iv) Geruch:

Wenn erwartet wird, dass das Material harmlos ist, geben Sie einen kleinen Teil der Probe in die Handfläche oder ein Becherglas mit geeigneter Größe und atmen Sie langsam und wiederholt die Luft über das Material ein. Wenn kein deutlicher Geruch wahrnehmbar ist, drücken Sie die Probe mit leichtem Druck zwischen Daumen und Zeigefinger oder zwischen den Handflächen. Wenn bekannt ist, dass das Material gefährlich ist, zerkleinern Sie es mit mechanischen Mitteln und gießen Sie dann eine kleine Menge kochendes Wasser in einem Becherglas auf die zerkleinerte Probe.

Bestimmen Sie zuerst die Stärke des Geruchs (keine, schwach, deutlich, stark) und dann den Geruchssinn (aromatisch, fruchtig, muffig, schimmelig, ranzig usw.). Ein direkter Vergleich des Geruchs mit einer definierten Substanz ist ratsam ( zB Pfefferminze sollte einen Menthol-ähnlichen Geruch haben, Nelke ähnelt Eugenol).

(v) Geschmack:

Chirata:

Bitter

Glycyrrhiza:

Süss

Zitrone:

Sauer.

Bestimmung von Wasser und flüchtigen Bestandteilen:

Ein Überschuss an Wasser in medizinischen Pflanzenmaterialien fördert das mikrobielle Wachstum, das Vorhandensein von Pilzen oder Insekten und den Abbau nach der Hydrolyse. Daher sollten für jedes Pflanzenmaterial Grenzwerte für den Wassergehalt festgelegt werden. Dies ist besonders wichtig für Materialien, die leicht Feuchtigkeit aufnehmen oder sich in Gegenwart von Wasser schnell zersetzen.

Folgende Methoden werden verwendet als:

1. Azeotrope Methode:

Die Azeotropie gibt eine direkte Messung des im untersuchten Material vorhandenen Wassers. Wenn die Probe zusammen mit einem nicht mischbaren Lösungsmittel wie Toluol R oder Xylol R ₁ destilliert wird, wird das in der Probe vorhandene Wasser von dem Lösungsmittel absorbiert. Das Wasser und das Lösungsmittel werden zusammen destilliert und beim Abkühlen im Aufnahmerohr getrennt. Wenn das Lösungsmittel wasserfrei ist, kann Wasser darin absorbiert bleiben, was zu falschen Ergebnissen führt. Es ist daher ratsam, das Lösungsmittel vor der Verwendung mit Wasser zu sättigen.

2. Trocknungsverlust:

Das Trocknen kann entweder durch Erwärmen auf 100 bis 105 ° C oder in Exsikkatoren über Phosphorpentoxid R unter Atmosphärendruck oder vermindertem Druck bei Raumtemperatur für eine bestimmte Zeitdauer durchgeführt werden. Das Trocknungsverfahren ist besonders nützlich für Materialien, die bei erhöhter Temperatur zu einer klebrigen Masse schmelzen.

Bestimmung der hämolytischen Aktivität:

Viele medizinische Pflanzenmaterialien, insbesondere solche aus den Familien Araliaceae, Sapindaceae, Primulaceae und Dioscoreaceae, enthalten Saponine. Die charakteristischste Eigenschaft von Saponinen ist ihre Fähigkeit, Hämolyse hervorzurufen, wenn sie einer Blutsuspension zugesetzt werden. Saponine erzeugen Veränderungen in der Erythrozytenmembran, wodurch Hämoglobin in das umgebende Medium diffundiert.

Die hämolytische Aktivität von Pflanzenmaterialien oder einer Saponin enthaltenden Zubereitung wird durch Vergleich mit der eines Referenzmaterials, Saponin R, bestimmt, das eine hämolytische Aktivität von 1000 Einheiten pro Gramm aufweist. Eine Suspension von Erythrozyten wird mit gleichen Volumina einer Reihenverdünnung des Pflanzenmaterialextrakts gemischt. Die niedrigste Konzentration, um die vollständige Hämolyse zu beeinflussen, wird bestimmt, nachdem die Mischungen für einen bestimmten Zeitraum stehen gelassen wurden. Ein ähnlicher Test wird gleichzeitig mit Saponin durchgeführt.

Bestimmung des Quellungsindex:

Viele Pflanzenmaterialien sind aufgrund ihrer Schwellungseigenschaften von besonderem therapeutischem oder pharmazeutischem Nutzen, insbesondere Gummis und solche, die eine nennenswerte Menge an Mucilage, Pektin oder Hemicellulosen enthalten.

Verfahren:

1 g Pflanzenmaterial genau in einen 25-ml-Messzylinder mit Glasstopfen wiegen. Der Innendurchmesser des Zylinders sollte etwa 16 mm betragen, die Länge des abgestuften Teils etwa 125 mm, in Abständen von 0, 2 ml von 0 bis 25 ml nach oben.

Füge 25 ml Wasser hinzu und schüttle die Mischung 1 Stunde lang alle 10 Minuten gründlich. 3 Stunden bei Raumtemperatur stehen lassen. Messen Sie das Volumen in ml, das vom Pflanzenmaterial eingenommen wird, einschließlich aller klebrigen Schleimstoffe. Berechnen Sie den Mittelwert der Einzelbestimmung.

Bestimmung des Schäumungsindex:

Pflanzenmaterialien enthalten Saponine, die beim Schütteln eines wässrigen Dekokts einen persistenten Schaum verursachen können.

Verfahren:

1 g grobes Pulver Pflanzenmaterial wird genau abgewogen und in einen 500-ml-Erlenmeyerkolben mit 100 ml kochendem Wasser überführt. Bei mäßigem Kochen 30 Minuten halten. Kühle und filtriere in einen 100-ml-Messkolben und füge ausreichend Wasser durch den Filter hinzu, um das Volumen zu erreichen. Gießen Sie das Dekokt in 10 aufeinandergefüllten Reagenzgläsern in aufeinanderfolgenden Portionen (1 ml, 2 ml, 3 ml usw.) auf 10 ml und stellen Sie das Volumen der Flüssigkeit in jedem Röhrchen mit Wasser auf 10 ml ein. Die Röhrchen verschließen und 15 Sekunden lang in Längsrichtung schütteln, zweimal pro Sekunde.

Lassen Sie 15 Minuten stehen und messen Sie die Höhe des Schaums. Wenn die Höhe des Schaums in jedem Röhrchen weniger als 1 cm beträgt, ist der Schaumindex weniger als 100. Wenn in einem Röhrchen eine Schaumhöhe von 1 cm gemessen wird, wird das Volumen des Auskochmaterials des Pflanzenmaterials im Röhrchen (a) wird verwendet, um den Index zu bestimmen.

Wenn es sich bei diesem Röhrchen um das erste oder zweite Röhrchen in einer Reihe handelt, bereiten Sie auf ähnliche Weise eine Zwischenverdünnung vor, um ein genaueres Ergebnis zu erhalten. Wenn die Höhe des Schaums in jedem Röhrchen mehr als 1 cm beträgt, ist der Schaumindex über 1000, in dem Fall wiederholen Sie die Bestimmung mit einer neuen Verdünnungsreihe, um ein Ergebnis zu erhalten.

Schäumungsindex = 1000 / a

Dabei ist a = Volumen des Auskochens in ml, das zur Herstellung der Verdünnung im Röhrchen verwendet wird, wobei ein Schäumen auf eine Höhe von 1 cm beobachtet wird.

Bestimmung mikrobieller Kontaminationen:

A. Test auf Salmonellen:

Nehmen Sie 10 g pulverisiertes Material und machen Sie das Volumen mit Lactose-Bouillon auf 100 ml. Die Mischung wird 4 Stunden bei 35 bis 37 ° C inkubiert. Weitere 10 ml dieser Probe werden entnommen. Dazu werden 100 ml Tetra-Methylenbrillantgrün-Gallensuppe gegeben und 24 Stunden bei 37-40 ° C inkubiert. 1 ml Probe wird daraus entnommen und auf ein Xylose-Lysin-Desoxyxcholat-Agarmedium gepflanzt.

Desoxyxcholatcitratagar oder brillantgrüner Agar können ebenfalls verwendet werden. Dies wird 50 Stunden bei 35 ° C inkubiert. Klein transparent und farblos mit einer undurchsichtigen, rosa Zone (umgeben von einer rosa bis roten Zone) weist auf das Vorhandensein von S. typhi hin.

Biochemischer Test: Die aus der obigen Kultur erhaltenen Kolonien werden mit polyvalenten Salmonella-Antiseren behandelt. Dies wird als Serotyping- oder Objektträger-Agglutinationstest bezeichnet. Das Auftreten einer Verklumpung der Zellen bestätigt das Vorhandensein von Salmonellenarten.

B. Test auf E. coli:

Ein Wirkstoff wird auf die Anwesenheit von E. coli getestet, indem 10 g pulverisiertes Material genommen und das Volumen mit Lactose-Bouillon auf 100 ml gebracht wird.

Diese Mischung sollte für 4 Stunden bei 35-37 ° C inkubiert werden. Davon wird 1 ml Probe entnommen und mit 9 ml MacConkey-Bouillon mit Konzentrationen von 100 mg / ml, 10 mg / ml, 0, 1 mg / ml und 0, 01 mg / ml seriell verdünnt. Diese Proben werden 18 Stunden bei 37 ° C inkubiert. Jeweils 1 ml wird auf MacConkey-Agarmedien inkubiert und für 24 Stunden bei 35 bis 37 ° C Wachstum von roten, im Allgemeinen nicht mucoiden Kolonien von Gram-negativen Stäbchen inkubiert, was die Anwesenheit von E. coli anzeigt.

C. Test auf Staphylococcus aureus:

Nehmen Sie 10 g Pulvermaterial und füllen Sie das Volumen mit NA-Bouillon auf 100 ml auf. Diese Mischung wird 4 Stunden bei 35 bis 37 ° C inkubiert. Ein ml dieser Probe wird auf Baird-Parker-Agarmedium F ausplattiert und 48 Stunden bei 35 bis 37 ° C inkubiert. Schwarze Kolonien von gram + v cocci, umgeben von klaren Zonen, weisen auf das Vorhandensein von Staphylococcus aureus hin.

Bestimmung von Tanninen:

Tannine sind Substanzen, die Tierhäute in Leder verwandeln können, indem sie Proteine ​​binden, um wasserunlösliche Substanzen zu bilden, die gegen proteolytische Enzyme resistent sind. Dieser Vorgang, der auf lebendes Gewebe angewendet wird, ist als "adstringierende" Wirkung bekannt und ist der Grund für die therapeutische Anwendung von Tanninen.

Methode:

10 g feines Pflanzenpulver genau in einen Erlenmeyerkolben einwiegen. Fügen Sie 150 ml Wasser hinzu und erhitzen Sie 30 Minuten lang in einem kochenden Wasserbad. Abkühlen, die Mischung in einen 250-ml-Messkolben überführen und mit Wasser auf Volumen verdünnen. Lassen Sie das feste Material sich absetzen und filtrieren Sie die Flüssigkeit durch ein Filterpapier mit einem Durchmesser von 12 cm. Die ersten 50 ml des Filtrats werden verworfen.

Um die Gesamtmenge des in Wasser extrahierbaren Materials zu bestimmen, werden 50 ml des Pflanzenmaterialextrakts zur Trockne eingedampft, der Rückstand in einem Ofen bei 105 ° C 4 Stunden lang getrocknet und gewogen (T ₁ ).

Zur Bestimmung der Menge an Pflanzenmaterial, das nicht gebunden ist, um Pulver zu verbergen und 60 Minuten lang gut schütteln. 50 ml des klaren Filtrats werden zur Trockne filtriert und eingedampft. Trockne den Rückstand in einem Ofen bei 105 ° C und wiege (T ₂ ).

Um die Löslichkeit von Hautpulver zu bestimmen, nimm 6 g Hautpulver, füge 80 ml Wasser hinzu und schüttle 60 Minuten lang. 50 ml des klaren Filtrats werden zur Trockne filtriert und eingedampft. Trockne den Rückstand in einem Ofen bei 105 ° C und wiege (T ₀ ).

Berechnen Sie die Menge der Tannine in Prozent anhand der folgenden Formel:

[T1 - (T2 - T0)] × 500 / w

Dabei ist w das Gewicht des Pflanzenmaterials in g.

Bestimmung von Pestizidrückständen:

1. Bestimmung von Chloriden

ich. Gerät:

Die Bestimmung erfolgt mit einem Spektrophotometer, das die Absorption bei 460 nm unter Verwendung von Absorptionszellen mit Weglängen von 2 cm und 10 cm messen kann

ii. Verfahren:

15 ml der nach der Verbrennung erhaltenen Lösung werden zusammen mit 1 ml Eisen (III) -ammoniumsulfat (0, 25 mol / l) und 3 ml Quecksilberthiocyanat in einen 50-ml-Erlenmeyerkolben gegeben. Den Inhalt der Flasche schwenken und 10 Minuten stehen lassen. Übertragen Sie einen Teil der Lösung in eine 2-cm-Zelle und messen Sie die Extinktion bei 460 nm mit Wasser in der Referenzzelle. Die Ablesung sollte umgehend erfolgen, um die Absorption von Chlorid aus der Luft zu minimieren.

Bereiten Sie eine Standardlösung von Natriumchlorid vor, die 5 hg Chlorid pro ml enthält. Aliquots dieser Lösung (0 ml, 2 ml, 4 ml, 6 ml, 8 ml und 10 ml) werden in eine Reihe von 50 ml Erlenmeyerkolben überführt und mit Wasser auf 15 ml verdünnt. Entwickeln Sie die Farbe und messen Sie die Extinktion wie oben beschrieben. Tragen Sie die Extinktion gegen den Chloridgehalt der Verdünnungen in ml auf und interpolieren Sie den Chloridgehalt der Lösungen des getesteten Materials.

2. Limit Test für Arsen:

ich. Gerät:

Die Apparatur besteht aus einer 100 ml Flasche oder einem Erlenmeyerkolben, der mit einem Gummi- oder Mattglasstopfen verschlossen ist, durch den ein Glasrohr hindurchgeht. Der untere Teil des Rohrs ist auf einen Innendurchmesser von 1, 0 mm gezogen und 15 mm von seiner Spitze entfernt befindet sich eine seitliche Öffnung von 2 bis 3 mm Durchmesser.

Wenn sich der Schlauch im Stopfen befindet, sollte sich die seitliche Öffnung mindestens 3 mm unter der unteren Oberfläche des Stopfens befinden. Das obere Ende des Rohrs hat eine recht ebene Oberfläche im rechten Winkel zur Rohrachse.

Ein zweites Glasrohr mit gleichem Innendurchmesser und 30 mm Länge und ähnlicher ebener Oberfläche wird in Kontaktfedern oder Klammern angeordnet. In das untere Röhrchen legen Sie 50 bis 60 mg Bleiacetat-Baumwolle, lose verpackt oder einen kleinen Baumwollpfropfen und ein gerolltes Stück Bleiacetatpapier mit einem Gewicht von 50 bis 60 mg ein. Legen Sie zwischen den flachen Oberflächen der Röhrchen eine Scheibe oder ein kleines Quadrat aus Quecksilberchloridpapier ein, die groß genug ist, um die Öffnung der Röhre zu bedecken.

ii. Verfahren:

Die Testlösung wird in die Flasche oder den Erlenmeyerkolben eingeführt. füge 5 ml 1 M Kaliumiodid und 10 g Zink als T hinzu. Setze die Apparatur sofort zusammen und tauche den Kolben in ein Wasserbad bei einer Temperatur, bei der eine gleichmäßige Gasentwicklung aufrechterhalten wird.

Nach 40 Minuten ist jeder auf dem Quecksilberchloridpapier erzeugte Fleck nicht intensiver als derjenige, der durch Behandeln von 1, 0 ml Arsenstandardlösung (10 ppm als), die mit Wasser auf 50 ml verdünnt wurde, auf die gleiche Weise erhalten wird.

3. Bestimmung von Schwermetallen

ich. Standardlösung:

In eine 50 ml Nessler-Zylinderpipette werden 1, 0 ml Blei-Standardlösung (20 ppm Pb) gegeben und mit Wasser auf 25 ml verdünnt. mit verdünnter Essigsäure oder verdünnter Ammoniaklösung auf einen pH-Wert zwischen 3, 0 und 4, 0 einstellen, mit Wasser auf etwa 35 ml verdünnen und mischen.

ii. Testlösung:

In einen 50-ml-Nessler-Zylinder werden 25 ml der für den Test vorbereiteten Lösung wie in der einzelnen Monographie angegeben gegeben oder die angegebene Menge der zu untersuchenden Substanz wird in ausreichend Wasser gelöst, um 25 ml zu erhalten. mit verdünnter Essigsäure oder verdünnter Ammoniaklösung auf einen pH-Wert zwischen 3 bis 4 einstellen, mit Wasser auf etwa 35 ml verdünnen und mischen.

iii. Verfahren:

Zu jedem Zylinder, der die Standardlösung und die Testlösung enthält, 10 ml frisch zubereitete Schwefelwasserstoff-Lösung zugeben, mischen, mit Wasser auf 50 ml verdünnen, 5 Minuten stehen lassen und über eine weiße Oberfläche nach unten blicken; Die Farbe der Testlösung ist nicht intensiver als die der Standardlösung.