Experiment zur Kultivierung von Tiervirus in embryoniertem Kükenei (mit Figur)

Experimentieren Sie, um Tiervirus in embryoniertem Hühnerei zu kultivieren!

Prinzip:

Viren können nur in lebenden Systemen wachsen. Sie können nicht in nicht lebenden Medien wie Nähragar oder Nährbouillon wachsen. Daher erfordert ihre Kultivierung Wirtszellen, die für das spezifische Virus anfällig sind.

Das Virus wie der Bakteriophage, der Bakterienzellen infiziert und in ihnen wächst, wird mit Bakterienkulturen als lebendem System kultiviert.

Zum Beispiel wird der Virenkoliphagen (ein Bakteriophage) unter Verwendung der Kultur der Bakterien E. coli kultiviert. Im Gegensatz dazu benötigen tierische Viren, die infizieren und im Körper von Tieren wachsen, empfindliche lebende Tiersysteme.

Die drei lebenden Tiersysteme, die zur Kultivierung von Tierviren in den Laboratorien verwendet werden, lauten wie folgt:

1. Anfällige Tiere:

Bei dieser Technik kann das zu kultivierende Virus im Körper eines lebenden Tieres wie Maus oder Meerschweinchen wachsen, das für dieses Virus anfällig ist. Diese Technik wird nicht mehr verwendet und wurde durch die folgenden neueren, effizienten und wirtschaftlichen Techniken ersetzt.

2. Gewebekultur:

Es ist eine hoch entwickelte Technik. Hier werden Tierzellen, von denen bekannt ist, dass sie für das zu kultivierende Virus anfällig sind und sich ebenfalls rasch vermehren, aus geeignetem lebendem Gewebe eines Tieres isoliert. Diese Zellen befinden sich in einem Glas- oder Plastikgefäß, das ein extrem reiches Nährmedium enthält. Die Zellen haften an der Oberfläche des Gefäßes und teilen sich weiter, bis die gesamte Oberfläche mit einer konfluenten Monolage von Zellen bedeckt ist. Dies wird als Gewebekultur bezeichnet.

Dann wird das zu kultivierende Virus in die anfällige Gewebekultur geimpft. Das Virus infiziert die lebenden Zellen der Gewebekultur, untergräbt ihre metabolische Maschinerie und repliziert sich schnell, wodurch es in den Zellen stark wächst.

3. Embryonierte Kükeneier:

Bei dieser einfachen und wirtschaftlichen Technik wird das zu kultivierende Virus in ein embryoniertes Kükenei injiziert. Das Virus wächst innerhalb des lebenden Hühnereis und verursacht eine Erkrankung im Embryo, die sich durch mehrere Krankheitssymptome (zytopathogene Effekte) äußert, die für dieses Virus spezifisch sind. Das Vorhandensein dieser Symptome zeigt das Wachstum dieses Virus im Ei an.

Erforderliche Materialien:

Zwei embryonierte Kükeneier, Kerzeinsatz, Tinktur Jod, absorbierende Baumwolle, 70% Alkohol, ein kleiner Bohrer, 1: 2-Verdünnung des Newcastle-Virus, Spritze, steriler Vasper, sterile Kochsalzlösung, Petrischalen, Bunsenbrenner, Laminar-Flow-Kammer, Entsorgungsglas Inkubator.

Verfahren:

1. Zwei embryonierte Kükeneier werden mit einer Kerzeinrichtung zum Glühen gebracht, um die Lebensfähigkeit des Embryos zu demonstrieren. Der Embryo ist lebensfähig, wenn er in Reaktion auf Wärme durch Licht eine Bewegung zeigt. Auch die Positionen des Luftsacks und der großen Blutgefäße werden während des Kerzens auf der Eierschale bestimmt und markiert (Abbildung 8.7).

2. Die Schale wird über dem Luftsack mit Tinkturjod desinfiziert und anschließend trocknen gelassen. Die gleiche Stelle wird mit saugfähiger Baumwolle, die mit 70% Alkohol getränkt ist, abgewischt.

3. Die Spitze eines kleinen Bohrers wird durch Eintauchen in 70% igen Alkohol sterilisiert und anschließend gebrannt.

4. Mit diesem Bohrer wird ein kleines Loch in der Schale über dem Luftsack in einer von den Blutgefäßen entfernten Region aseptisch angebracht.

5. 0, 2 ml der 1: 2-Verdünnung des Newcastle-Virus werden unter Verwendung einer sterilisierten Spritze aseptisch in die Allantoishöhle eines der beiden Eier injiziert. Dazu wird das Ei in einer senkrechten Position gehalten, die Nadel der Spritze wird durch das Loch in der Schale in einem Winkel von 45 ° bis zum Griff eingeführt, durchstößt die Luftsackmembran und dringt in die Allantoishöhle ein. Dieses mit dem Virus beimpfte Ei dient als "Testei".

6. Nach der Inokulation wird die Nadel zurückgezogen und das Loch in der Schale mit einem sterilen, heißen Vasper verschlossen.

7. Mit derselben Technik werden 0, 2 ml sterile Salzlösung in das andere embryonierte Kükenei beimpft, das als "Kontrollei" dient.

8. Beide Eier werden bei 37 ° C für 3 bis 4 Tage in einem Brutschrank mit geeigneter Luftfeuchtigkeit inkubiert.

9. Die Beobachtungen werden täglich notiert.

10. Sobald der Tod festgestellt wurde, wird der Embryo aus seiner Schale entfernt und der Inhalt in eine Petrischale gegossen und erneut beobachtet.

11. Alle kontaminierten Materialien werden in ein Becherglas mit Bleichpulver entsorgt.

Beobachtungen:

1. Die Eier werden jeden Tag während der Inkubation kandiert und auf embryonalen Tod beobachtet, was durch das Aufhören der Bewegung, die normalerweise 3 bis 4 Tage nach der Inokulation des Virus auftritt, nachgewiesen wird.

2. Sobald der Tod festgestellt wurde, wird der Embryo aus seiner Schale entfernt und der Inhalt in eine Petrischale gegossen. Es wird bei nekrotischen Läsionen und Anzeichen von Blutungen beobachtet.

3. Das Kontrollei wird auf Anzeichen von zytopathogenen Wirkungen untersucht.

4. Die Beobachtungen sind in Tabelle 8.2 aufgeführt.