Kohlenhydratfermentationstest an Bakterien, um herauszufinden, ob sie Kohlenhydrate fermentieren können

Kohlenhydratfermentationstest an Bakterien, um herauszufinden, ob sie Kohlenhydrate fermentieren können!

Prinzip:

Einige Bakterien können Kohlenhydrate, insbesondere Zucker, fermentieren. Unter ihnen kann jedes Bakterium nur einen Teil des Zuckers fermentieren, während es die anderen nicht fermentieren kann.

So sind die Zucker, die ein Bakterium fermentieren kann, und die Zucker, die es nicht kann, das Merkmal der Bakterien.

Der Kohlenhydratfermentationstest wird durchgeführt, um die Fähigkeit der Bakterien, die Zucker wie Glukose, Saccharose, Laktose, Maltose und Xylose sowie deren alkoholische Derivate wie Aesculin, Salicin, Adonit, Dulcitol und Sorbit zu fermentieren, separat zu testen. Wenn die Bakterien einen Zucker oder ein Zuckerderivat fermentieren können, wird Säure produziert, die den pH-Wert verringert und die Farbe des Bromkresols von Purpur zu Gelb ändert.

Wenn es sich dabei um ein "aerogenes Bakterium" handelt, werden sowohl Säure als auch Gas (C0 ₂ ) produziert, während es sich bei ananerogenen Bakterien nur um Säure handelt, die kein Gas enthält. Die Gasproduktion wird durch seine Ansammlung als Blase in einem umgekehrten Durham-Röhrchen (Miniatur-Reagenzglas) angezeigt.

Beim Kohlenhydratfermentationstest werden die Testbakterien in einer Nährlösung gezüchtet, die einen der Zucker oder Zuckerderivate und Bromcresolpurpur enthält. Eine umgekehrte Durham-Röhre wird darin untergetaucht.

Wenn die Bakterien „die Fähigkeit haben, Zucker oder Zuckerderivat zu gären, ändert sich die Farbe der Brühe von Purpur zu Gelb. Wenn Gasansammlung als Blase in der Durham-Röhre gesehen wird, handelt es sich um ein akrogenes Bakterium, und wenn keine Gasansammlung auftritt, handelt es sich um anaerogene Bakterien.

Erforderliche Materialien:

Reagenzgläser, Durham-Röhrchen, Erlenmeyerkolben, Wattestopfen, Impföse, Autoklav, Bunsenbrenner, Laminar-Flow-Kammer, Entsorgungsgefäß, Inkubator, Kohlenhydrat-Bouillon (Bouillon, die den spezifischen Zucker oder Zuckerderivate wie Glucose, Sucrose, Lactose, Maltose, Xylose enthält Aesculin, Salicin, Adonitol, Dulcitol, Sorbitol usw.), isolierte Kolonien oder Reinkulturen von Bakterien.

Verfahren:

1. Die Inhaltsstoffe des Kohlenhydratbrühenmediums (enthaltend das erforderliche Kohlenhydrat und Bromcresolpurpur als Hauptkomponenten) oder das für 100 ml Brühe benötigte fertige Pulver werden abgewogen und in 100 ml destilliertem Wasser in einem 250-ml-Erlenmeyerkolben gelöst durch Schütteln und Verwirbeln (Abbildung 7.8).

2. Sein pH-Wert wird unter Verwendung eines pH-Papiers oder eines pH-Meters bestimmt und mit 0, 1 N HCl auf 1, 8 eingestellt, wenn es mehr ist, oder mit 0, 1 N NaOH, wenn es weniger ist. Der Kolben wird gegebenenfalls erhitzt, um die Bestandteile vollständig aufzulösen.

3. Die Bouillon wird in fünf Reagenzgläser (je ca. 10 ml) verteilt.

4. In jedes Reagenzglas wird ein Durham-Röhrchen in umgekehrter Form in die Brühe gegeben. Die Durham-Röhren enthalten Luft und schwimmen. Während der Sterilisation verdrängt heißer Dampf diese Luft, wodurch sie in die Brühe eintauchen. Daher besteht keine Notwendigkeit, Luft aus den Durham-Röhrchen zu entfernen, indem sie vor der Sterilisation mit der Brühe gefüllt werden, um sie in der Brühe einzutauchen.

5. Die Reagenzgläser sind mit Baumwolle verstopft, mit Bastelpapier bedeckt und mit Faden oder Gummiband gebunden.

6. Die Bouillonröhrchen werden 15 Minuten bei 121 ° C (15 psi Druck) in einem Autoklaven sterilisiert. Alternativ werden 90 ml des Basismediums (Medium ohne Kohlenhydrat) im Autoklaven sterilisiert und dazu werden nach Abkühlen 10 ml der durch Membranfiltration sterilisierten Kohlenhydratlösung (10%) zugegeben. Dies ist besonders wichtig für wärmeempfindliche Kohlenhydrate, die während der Hitzesterilisation abgebaut werden.

7. Man lässt die Bouillonröhrchen auf Raumtemperatur abkühlen.

8. Die Testbakterien werden aseptisch, vorzugsweise in einer Kammer mit laminarer Strömung, mit Hilfe einer über Bunsenflamme sterilisierten Impföse in die Brühe geimpft. Die Schlaufe wird nach jeder Impfung sterilisiert.

9. Die inokulierten Bouillonröhrchen werden 24 Stunden bei 37 ° C in einem Inkubator inkubiert.